矗立在虎尾公安路和院前街路口的虎尾長老教會創立於昭和4年（1929），是虎尾鎮內年代最久遠的教會，其母堂為光緒16年（1890）所成立的土庫長老教會。
現今虎尾教會禮拜堂和牧師館為民國69年教徒為慶祝設教50周年而獻立的新堂，另位於斗南鎮大業路75號的十字園則是教會在民國66年設立的墓園，園區裡安（移）葬了許多早期的第一代教徒，是了解虎尾教會發展史重要的場域。
教會不僅是信徒禱告和聚會的場所，1947年228事件爆發時虎尾長老教會更展現了上帝之愛，提供政治受難者一個關懷和庇護的空間。據楊彥騏先生引述一位住在虎尾教會附近的老太太描述，當時虎尾機場那邊有很多人倉皇地往街上逃，有幾位不知如何是好的民軍跑到教會躲藏。當國軍要進到長老教會時，一位牧師站在門前，心平氣和地對軍官說，教會是美國人的，要進去搜索須經美國人同意，如果隨便進去，沒有人擔待得起。國軍被牧師的一言鎮住，不敢入內搜查，因此救了不少民軍的性命。
