仁和宮作為二林地區重要的信仰中心，經常有許多信眾前來祭拜許願。仁和宮註生娘娘位於後殿右側，若有婚姻、夫妻相處等困擾，或者求子等心願，可向註生娘娘祈求。民間流傳，向註生娘娘求子時，獻上白花象徵求兒子，紅花則是求女兒，若無祈求特定的性別，則將白花、紅花一併獻上。

二林仁和宮主祀天上聖母，陪祀神明有觀世音菩薩、虎爺公、註生娘娘、文昌帝君、土地公、十八羅漢。因缺乏文獻佐證，興建年代難以判斷。但歷年修建皆有碑文記載，可大致了解不同時空狀態下的二林市街。仁和宮現存最久遠的碑文為1815年（嘉慶二十年）重修竣工後，留存的「重修仁和宮碑記」及捐獻名錄。